狗狗测试纸怎么看冠状？
冠状病毒（canine coronavirus，CoV）感染犬可表现为肠炎、呼吸道病和肝炎综合征三种临床症状[1]。 2017年1月3日-4日，美国明尼苏达州某宠物医院接诊了5只患腹泻的狗，其中4只死亡；同日，同一医院的另一家连锁诊所也报告了2例类似的病例。发病宠物均来自该医院所在的明尼阿波利斯市及周边地区。同年1月底，美国堪萨斯州又有16只狗出现呕吐和腹泻症状而就医，这些狗曾去过上述两地的狗展并接触了患病犬只。
美国疾控中心（CDC）于2月17日开始对这一暴发流行病的病原进行检测。2月28日报告称，初步检验结果证实，上述流行病的病原体是犬冠状病毒（CCoV）新变异株，与人类中爆发的非典型肺炎SARS有关病毒有亲缘关系。由于尚未发现该病毒在人类或猫中的传播证据，因此推测其在狗群中传播，而且这种病毒具有突变，使其能够突破原来感染引起的免疫保护[2]。此后数月内全球多个国家和地区陆续报道了类似的暴发疫情。截至2017年底，已有超过16个国家和地区发生由不同变异株CCoV引发的犬冠状病毒急性传染病疫情的报道，涉及3大洲9个国家及地区的26个州，超过10000只狗受到影响，且大多为年轻、未接种疫苗的狗。
我国自2017年以来先后有多地发生CCoV感染病例或疫情。2017年5月起，国内相继从上海、江苏、吉林等地送检的犬粪便样本中分离到CCoV毒株。同时发现部分分离株存在S基因缺失现象。2017年下半年开始，多地临床医生反映其诊治的腹泻病人多系幼龄犬只，临床以剧烈腹泻为主，伴有食欲不振等全身症状，有的还伴有轻度发热、呕吐等症状。多数病例经及时治疗，预后良好；但也观察到个别病例因腹泻引起脱水和电解质代谢紊乱导致死亡的情况。
本检测卡用于定性检查粪便样品中的CCoV核酸。使用前请仔细阅读说明书，并按说明书操作。 本试剂盒仅供专业实验室使用，不可自用检测！
一、材料与器具 1.材料 1.1PCR扩增反应管：A管（含1×Taq DNA聚合酶缓冲液2μL，dNTPs2μL，MgCl22μL，TaqDNA聚合酶0.125U）；B管（灭菌双蒸水13.85μL）。 PCR专用离心管。
1.2反应混合物：10X Buffer 10μL，dNTPMixture 2 μL，TagMix 0.5 μL，上下游引物（CCoV，F-GGTATCGTTAGTGGACAGTTGC，R-CTCACACTTCAAAGCAAGAATTTAG）各1μL，灭菌双蒸水补至50μL；
1.3PCR反应体系：反应混合物50μL/孔；
1.4质粒标准品：含CCoV全基因序列的质粒载体pMD19-CCoV（10ng/μL）；
1.5阳性对照：含有CCoV F基因片段的阳性重组质粒pEGFP/CCov;
1.6阴性对照：不含模板DNA的空白孔。 1.7PCR产物纯化试剂盒：购自北京博奥生物有限公司，产品编号为BD217066。
二、方法与步骤 2.1模板制备 (模板稀释：取1ul模板加入19ul灭菌去离子水的混合溶液， 混匀后吸打数次，作为PCR反应模板) 采集新鲜的粪样（新鲜粪便采集后用洁净的灭菌棉棒沾拭粪便表面，然后放入灭菌的密封袋，尽快送至实验室进行粪便培养或粪便病毒核酸检测。对于粪便标本量不足，无法进行粪便培养和粪便病毒核酸检测时，可以采用粪便拭子替代粪便标本进行病毒的检测）。收集粪便，装入干净的灭菌容器里，置于37℃孵育2h以上，直到粪便完全变软为止，然后移入灭菌离心管中，用灭菌的吸管轻轻吹打粪便，使粪便与消化液充分混匀，10000r/min离心10分钟，去除上清，沉淀中加入1ml无菌双蒸水，轻轻研磨混匀，10000r / min离心10min，取上清作为PCR反应模板。
2.2将待检粪便样本进行10倍梯度系列稀释：1：10，1：100，1：1000，1：10000，取100μl稀释后的粪便样本加入PCR反应管中，作为PCR反应体系。
2.3加样：依次加入10μl A，B，C，D，E，F六孔中，轻轻混匀。
2.4预扩增程序：95°C变性3分钟→40个循环(95°C变性30秒，60°C退火30秒);
2.5特异性扩增程序：预扩增程序结束后，立即开始特异性扩增程序：95°C变性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸45秒，28个循环；最后72°C延伸10分钟。
三、结果解释 3.1质控检测结果 当阳性对照孔Ct值≤20，阴性对照孔Ct>35时，判断本实验质量合格，否则应分析原因并重新试验。
3.2样本检测结果 根据每个反应孔的荧光数值，计算样本Ct值大小，Ct值为反应孔的荧光信号达到设定阈值时的循环数。 Ct值=特定温度循环次数——预扩增反应特定温度循环次数 将每个样本的Ct值与阴性对照的Ct值相比较，若样本Ct值小于等于阴性对照Ct值，则认为样本为阴性，否则为阳性。
四、注意事项 试剂盒仅限实验室使用， 不可用于家用自测！